پودر نانو کارواش از برترین محصولات نامی ایران در شرکت هگزاشیمی

 پودر نانو کارواش از برترین محصولات نامی ایران در شرکت هگزاشیمی

Triton X-100 از BDH (لندن، انگلستان) و TnBP از Aldrich (Steinheim، آلمان) خریداری شد. Amberlite XAD-7 توسط Rohm and Haas (فیلادلفیا، PA، ایالات متحده آمریکا) عرضه شد. Sephacryl S-300 HR توسط Pharmacia (Uppsala، سوئد) عرضه شد. تمام مواد شیمیایی دیگر از Merck (دارمشتات، آلمان) یا Serva (هایدلبرگ، آلمان) خریداری شدند. ایمونوگلوبولین های خشک شده یخ زده تولید شده توسط تفکیک اتانول سرد [19] در موسسه ایمنی شناسی، زاگرب، کرواسی، در آب برای تزریق در pH 5.3 تا 5.5 حل شده و از طریق یک فیلتر 2-m فیلتر شدند. سپس 0.3% (w/w) TnBP و 1% (w/w) Triton X-100 اضافه شد و به آرامی به مدت 6 ساعت در دمای اتاق مخلوط شد. محلول نهایی به دلیل تشکیل میکروامولسیون TnBP در حضور Triton X-100 کدر شد. با در نظر گرفتن غلظت بالای پروتئین (بیش از 100 میلی گرم در میلی لیتر) و کدورت محلول پس از تیمار S/D، محلول ایمونوگلوبولین سه بار قبل از پردازش بیشتر رقیق شد. حذف معرف های S/D با فرآیند جذب روی رزین Amberlite XAD-7 انجام شد. رزین به حالت تعلیق درآمده و در بافر فسفات 0.01 مولار، pH 7.1 حاوی 0.5 مولار NaCl متعادل شد. پس از سه بار رقیق شدن در بافر متعادل، نمونه اعمال شد و سپس با همان بافر شسته شد تا جذب در 280 نانومتر کمتر از 0.05 شود. سپس رزین با 1.0 مولار NaCl در همان بافر شسته شد تا بقیه پروتئین‌های غیراختصاصی در نهایت حذف شوند. معرف های S/D جذب شده سپس با اتانول 96% (وزنی/حجمی) شسته شدند و ستون متعاقبا با آب برای تزریق شسته و مجدداً متعادل شد. بهداشت رزین Amberlite XAD-7 با شستشو با 0.5 مولار هیدروکسید سدیم انجام شد. به منظور تعیین ظرفیت Amberlite XAD-7 برای اتصال Triton X-100 و TnBP، آزمایشاتی بر روی ستون های تحلیلی (5_1.6 سانتی متر) انجام شده است. مقادیر مختلف ایمونوگلوبولین های تیمار شده با S/D (2.0، 2.5، 5.0 و 10.0 میلی لیتر) پس از سه بار رقیق شدن با بافر ستونی، به ستون هایی که دارای همان حجم Amberlite XAD-7 (|10 میلی لیتر) بودند، اعمال شد و همانطور که قبلا توضیح داده شد شستشو داده شد. فراکسیون های جمع آوری شده از نظر پروتئین، TnBP و محتوای Triton X-100 بررسی شدند. پس از تعیین ظرفیت رزین Amberlite XAD-7، آزمایش‌های تحلیلی بیشتری با 7 میلی‌لیتر ایمونوگلوبولین‌های تیمار شده با S/D انجام شد که روی تقریباً 40 میلی‌لیتر آمبرلیت XAD-7 (20_1.6 سانتی‌متر) اعمال شد. همانطور که قبلا توضیح داده شد شستشو داده شد. فراکسیون های شسته شده جمع شده و برای پروتئین ها، TnBP و Triton X-100 مورد بررسی قرار گرفتند. استخر کسری که حاوی ایمونوگلوبولین ها بود به دلیل مقدار کمی شسته شده پردازش نشد. پودر نانو کارواش